PRUEBA DE PCR EN INFECCIONES URINARIAS

Tema: Cultivo y detección basada en PCR de bacterias que causan infección del tracto urinario en muestras de orina

Objetivos: 

Diagnosticar las infecciones del tracto urinario mediante pruebas  de cultivo de rutina y por métodos moleculares.

El objetivo del estudio es  dar a los pacientes un diagnóstico molecular oportuno y un alivio temprano a las personas afectadas mediante el uso de antibióticos de elección, especialmente en el caso de cepas resistentes

Tipo de muestra biológica: Urocultivo 

Tipo de ácido nucleico a ser extraído: El ADN plasmídico usando el kit GeneJET Plasmid Miniprep de Thermo Fisher Scientific Lituania 

Gen o secuencia a amplificar:  El gen blaNDM-1 se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) usando cebadores; F-5'- GGG CAG TCG CTT CCA ACG GT-3 'y R-5'- GTA GTG CTC AGT GTC GGC AT -3

Métodos de extracción del ADN: 

Desnaturalización inicial:  95 ° C durante cinco minutos

Templado: 58 ° C durante 30 segundos 

Extensión final:  a 72 ° C durante  5minutos

Tipo de PCR:  Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) cuantitativa-30 ciclos 
Sensibilidad y Especificidad: No aplica  

Visualización

Cuatro aislados bacterianos resistentes a carbapenem de dos especies diferentes. a saber, Escherichia coli (Ec-31, Ec-387 y Ec-867 y Klebsiella pneumoniae (Kp-651) fueron positivas para el gen blaNDM-1 que muestra bandas en la posición de 475 pb 

REFERENCIA BIBLIOGRAFICA 

Pirkani.G  Cultivo y detección basada en PCR de bacterias que causan infección del tracto urinario en muestras de orina [Internet]. 2020 Marzo [cited 2020 Julio 18]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7150396/